Apa itu elektroforesis gel poliakrilamida?

Elektroforesis Gel Poliakrilamida

Elektroforesis gel adalah teknik dasar di laboratorium di seluruh disiplin biologi, yang memungkinkan pemisahan makromolekul seperti DNA, RNA, dan protein.Media dan mekanisme pemisahan yang berbeda memungkinkan himpunan bagian dari molekul-molekul ini untuk dipisahkan secara lebih efektif dengan memanfaatkan karakteristik fisiknya.Untuk protein khususnya, elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) sering menjadi teknik pilihan.

1

PAGE adalah teknik yang memisahkan makromolekul seperti protein berdasarkan mobilitas elektroforesisnya, yaitu kemampuan analit untuk bergerak menuju elektroda dengan muatan yang berlawanan.Di PAGE, ini ditentukan oleh muatan, ukuran (berat molekul) dan bentuk molekul.Analit bergerak melalui pori-pori yang terbentuk dalam gel poliakrilamida.Tidak seperti DNA dan RNA, protein bervariasi dalam muatan sesuai dengan asam amino yang tergabung, yang dapat mempengaruhi bagaimana mereka berjalan.String asam amino juga dapat membentuk struktur sekunder yang mempengaruhi ukuran nyata mereka dan akibatnya bagaimana mereka dapat bergerak melalui pori-pori.Oleh karena itu kadang-kadang diinginkan untuk mendenaturasi protein sebelum elektroforesis untuk linierisasi mereka jika perkiraan ukuran yang lebih akurat diperlukan.

HALAMAN SDS

Elektroforesis gel natrium-dodesil sulfat poliakrilamida adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan molekul protein dengan massa 5 hingga 250 kDa.Protein dipisahkan hanya berdasarkan berat molekulnya.Natrium dodesil sulfat, suatu surfaktan anionik, ditambahkan dalam pembuatan gel yang menutupi muatan intrinsik sampel protein dan memberi mereka rasio muatan terhadap massa yang serupa.Dengan kata sederhana, itu mendenaturasi protein dan memberi mereka muatan negatif.

2

HALAMAN Asli

Native PAGE adalah teknik yang menggunakan gel non-denaturasi untuk pemisahan protein.Tidak seperti SDS PAGE, tidak ada zat pendenaturasi yang ditambahkan dalam pembuatan gel.Akibatnya, pemisahan protein terjadi berdasarkan muatan dan ukuran protein.Dalam teknik ini, konformasi, pelipatan dan rantai asam amino protein adalah faktor yang bergantung pada pemisahan.Protein tidak rusak dalam proses ini, dan dapat diperoleh kembali setelah pemisahan selesai.

3

Bagaimana cara kerja elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE)?

Prinsip dasar PAGE adalah memisahkan analit dengan melewatkannya melalui pori-pori gel poliakrilamida menggunakan arus listrik.Untuk mencapai hal ini, campuran akrilamida-bisakrilamida dipolimerisasi (poliakrilamida) dengan penambahan amonium persulfat (APS).Reaksi, yang dikatalisis oleh tetramethylethylenediamine (TEMED), membentuk struktur seperti jaring dengan pori-pori di mana analit dapat bergerak (Gambar 2).Semakin tinggi persentase total akrilamida yang terkandung dalam gel, semakin kecil ukuran pori, sehingga semakin kecil protein yang dapat melewatinya.Rasio akrilamida terhadap bisakrilamida juga akan memengaruhi ukuran pori, tetapi rasio ini sering kali dipertahankan konstan.Ukuran pori yang lebih kecil juga mengurangi kecepatan di mana protein kecil dapat bergerak melalui gel, meningkatkan resolusinya dan mencegahnya mengalir ke buffer dengan cepat ketika arus diterapkan.

3-1

Peralatan untuk Elektroforesis Gel Poliakrilamida

Sel Elektroforesis Gel (Tank/Chamber)
Tangki gel untuk elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) berbeda dengan tangki gel agarosa.Tangki gel agarosa berbentuk horizontal, sedangkan tangki PAGE vertikal.Dengan sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang), gel tipis (biasanya 1,0 mm atau 1,5 mm) dituangkan di antara dua pelat kaca dan dipasang sehingga bagian bawah gel terendam dalam buffer dalam satu ruang dan bagian atas terendam dalam buffer di kamar lain.Ketika arus diterapkan, sejumlah kecil buffer bermigrasi melalui gel dari ruang atas ke ruang bawah.Dengan klem yang kuat untuk menjamin rakitan tetap dalam posisi tegak, peralatan ini memfasilitasi gel berjalan cepat dengan pendinginan yang merata sehingga menghasilkan pita yang berbeda.

4

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) memproduksi berbagai ukuran sel elektroforesis gel poliakrilamida (tangki/ruang).Model DYCZ-20C dan DYCZ-20G adalah sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang) untuk analisis sekuensing DNA.Beberapa sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang) kompatibel dengan sistem blotting, seperti model DYCZ-24DN, DYCZ-25D dan DYCZ-25E kompatibel dengan model sistem Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G dan DYCZ-40F, yang digunakan untuk mentransfer molekul protein dari gel ke membran.Setelah elektroforesis SDS-PAGE, Western Blotting adalah teknik untuk mendeteksi protein tertentu dalam campuran protein.Anda dapat memilih sistem blotting ini sesuai dengan persyaratan eksperimental.

6

Catu Daya Elektroforesis
Untuk menyediakan listrik untuk menjalankan gel, Anda memerlukan catu daya elektroforesis.Di Liuyi Biotechnology kami menyediakan berbagai catu daya elektroforesis untuk semua aplikasi.Model DYY-12 dan DYY-12C dengan tegangan dan arus stabil tinggi dapat memenuhi kebutuhan elektroforesis tegangan tinggi.Ini memiliki fungsi stand, timing, VH dan aplikasi langkah demi langkah.Mereka ideal untuk aplikasi elektroforesis sekuensing DNA dan IEF.Untuk aplikasi elektroforesis protein dan DNA umum, kami memiliki model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, dan sebagainya, yang juga merupakan catu daya penjualan panas dengan sel elektroforesis (tangki/ruang).Ini dapat digunakan untuk aplikasi elektroforesis tegangan menengah dan rendah, seperti untuk penggunaan laboratorium sekolah, laboratorium rumah sakit dan sebagainya.Lebih banyak model untuk catu daya, silakan kunjungi situs web kami.

7

Merek Liuyi memiliki sejarah lebih dari 50 tahun di China dan perusahaan dapat menyediakan produk yang stabil dan berkualitas tinggi di seluruh dunia.Melalui pengembangan bertahun-tahun, itu layak menjadi pilihan Anda!

For more information about us, please contact us by email [email protected] or [email protected]

Referensi untuk Apa itu elektroforesis gel poliakrilamida?
1. Elektroforesis gel poliakrilamida Karen Steward PhD, Cara Kerja, Varian Teknik, dan Aplikasinya


Waktu posting: 23 Mei-2022