Apa itu elektroforesis gel poliakrilamida?

Elektroforesis Gel Poliakrilamida

Elektroforesis gel adalah teknik dasar di laboratorium lintas disiplin ilmu biologi, yang memungkinkan pemisahan makromolekul seperti DNA, RNA, dan protein. Media dan mekanisme pemisahan yang berbeda memungkinkan himpunan bagian dari molekul-molekul ini dipisahkan secara lebih efektif dengan memanfaatkan karakteristik fisiknya. Khususnya untuk protein, elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) sering kali merupakan teknik pilihan.

PAGE adalah teknik yang memisahkan makromolekul seperti protein berdasarkan mobilitas elektroforesisnya, yaitu kemampuan analit untuk bergerak menuju elektroda yang muatannya berlawanan. Di PAGE, hal ini ditentukan oleh muatan, ukuran (berat molekul) dan bentuk molekul. Analit bergerak melalui pori-pori yang terbentuk dalam gel poliakrilamida. Tidak seperti DNA dan RNA, protein memiliki muatan yang berbeda-beda sesuai dengan asam amino yang dimasukkan, yang dapat memengaruhi cara kerjanya. Untaian asam amino juga dapat membentuk struktur sekunder yang mempengaruhi ukurannya dan akibatnya bagaimana ia dapat bergerak melalui pori-pori. Oleh karena itu, terkadang diinginkan untuk mendenaturasi protein sebelum elektroforesis untuk membuat linierisasinya jika diperlukan perkiraan ukuran yang lebih akurat.

HALAMAN SDS

Elektroforesis gel natrium-dodesil sulfat poliakrilamida adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan molekul protein bermassa 5 hingga 250 kDa. Protein dipisahkan hanya berdasarkan berat molekulnya. Natrium dodesil sulfat, surfaktan anionik, ditambahkan dalam pembuatan gel yang menutupi muatan intrinsik sampel protein dan memberi mereka rasio muatan terhadap massa yang serupa. Dengan kata sederhana, ini mengubah sifat protein dan memberi mereka muatan negatif.

HALAMAN Asli

Native PAGE adalah teknik yang menggunakan gel non-denaturasi untuk pemisahan protein. Berbeda dengan SDS PAGE, tidak ada zat denaturasi yang ditambahkan dalam pembuatan gel. Akibatnya, pemisahan protein terjadi berdasarkan muatan dan ukuran protein. Dalam teknik ini, konformasi, lipatan, dan rantai asam amino dari protein merupakan faktor yang bergantung pada pemisahan. Protein tidak rusak dalam proses ini, dan dapat diperoleh kembali setelah pemisahan selesai.

Bagaimana cara kerja elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE)?

Prinsip dasar PAGE adalah memisahkan analit dengan melewatkannya melalui pori-pori gel poliakrilamida menggunakan arus listrik. Untuk mencapai hal ini, campuran akrilamida-bisakrilamida dipolimerisasi (poliakrilamida) dengan penambahan amonium persulfat (APS). Reaksi tersebut, yang dikatalisis oleh tetramethylethylenediamine (TEMED), membentuk struktur seperti jaring dengan pori-pori di mana analit dapat bergerak (Gambar 2). Semakin tinggi persentase total akrilamida yang terkandung dalam gel, maka semakin kecil ukuran pori-porinya, sehingga semakin kecil pula protein yang dapat melewatinya. Rasio akrilamida dan bisakrilamida juga akan memengaruhi ukuran pori, namun rasio ini sering kali dijaga agar tetap konstan. Ukuran pori yang lebih kecil juga mengurangi kecepatan pergerakan protein kecil melalui gel, meningkatkan resolusinya dan mencegahnya mengalir ke buffer dengan cepat ketika arus dialirkan.

Peralatan Elektroforesis Gel Poliakrilamida

Sel Elektroforesis Gel (Tangki/Ruang)
Tangki gel untuk elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) berbeda dengan tangki gel agarosa. Tangki gel agarosa berbentuk horizontal, sedangkan tangki PAGE berbentuk vertikal. Dengan sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang), gel tipis (biasanya 1,0 mm atau 1,5 mm) dituangkan di antara dua pelat kaca dan dipasang sehingga bagian bawah gel terendam dalam buffer dalam satu ruang dan bagian atas terendam dalam buffer di ruangan lain. Ketika arus dialirkan, sejumlah kecil buffer bermigrasi melalui gel dari ruang atas ke ruang bawah. Dengan penjepit yang kuat untuk menjamin rakitan tetap dalam posisi tegak, peralatan ini memfasilitasi kerja gel yang cepat dengan pendinginan yang merata sehingga menghasilkan pita yang berbeda.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) memproduksi berbagai ukuran sel elektroforesis gel poliakrilamida (tangki/ruang). Model DYCZ-20C dan DYCZ-20G adalah sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang) untuk analisis sekuensing DNA. Beberapa sel elektroforesis vertikal (tangki/ruang) kompatibel dengan sistem blotting, seperti model DYCZ-24DN, DYCZ-25D dan DYCZ-25E kompatibel dengan model sistem Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G dan DYCZ-40F, yang digunakan untuk mentransfer molekul protein dari gel ke membran. Setelah elektroforesis SDS-PAGE, Western Blotting adalah teknik untuk mendeteksi protein tertentu dalam campuran protein. Anda dapat memilih sistem blotting ini sesuai dengan persyaratan eksperimental.

Catu Daya Elektroforesis
Untuk menyediakan listrik untuk menjalankan gel, Anda memerlukan catu daya elektroforesis. Di Liuyi Biotechnology kami menyediakan serangkaian pasokan listrik elektroforesis untuk semua aplikasi. Model DYY-12 dan DYY-12C dengan tegangan dan arus stabil tinggi dapat memenuhi kebutuhan elektroforesis tegangan tinggi. Ini memiliki fungsi stand, timing, VH dan aplikasi langkah demi langkah. Mereka ideal untuk aplikasi elektroforesis pengurutan IEF dan DNA. Untuk aplikasi elektroforesis protein dan DNA secara umum, kami memiliki model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, dan seterusnya, yang juga merupakan catu daya penjualan panas dengan sel elektroforesis (tangki/ruang). Ini dapat digunakan untuk aplikasi elektroforesis tegangan menengah dan rendah, seperti untuk penggunaan laboratorium sekolah, laboratorium rumah sakit dan sebagainya. Lebih banyak model untuk catu daya, silakan kunjungi situs web kami.

Merek Liuyi memiliki sejarah lebih dari 50 tahun di Tiongkok dan perusahaan tersebut dapat menyediakan produk yang stabil dan berkualitas tinggi di seluruh dunia. Melalui pengembangan bertahun-tahun, ini layak menjadi pilihan Anda!

Untuk informasi lebih lanjut tentang kami, silakan hubungi kami melalui email[dilindungi email] or [dilindungi email].

Referensi Apa itu elektroforesis gel poliakrilamida?
1. Karen Steward PhD Elektroforesis gel poliakrilamida, Cara Kerja, Varian Teknik, dan Penerapannya