Kami berbagi beberapa pertimbangan minggu lalu untuk menggunakan elektroforesis membran selulosa asetat, dan kami akan menyelesaikan topik ini di sini hari ini untuk referensi Anda.
Pemilihan Konsentrasi Penyangga
Konsentrasi buffer yang digunakan dalam elektroforesis membran selulosa asetat umumnya lebih rendah dibandingkan dengan yang digunakan dalam elektroforesis kertas. pH yang umum digunakan adalah 8,6Bbuffer arbital biasanya dipilih dalam kisaran 0,05 mol/L hingga 0,09 mol/L. Saat memilih konsentrasi, penentuan awal dilakukan. Misalnya, jika panjang strip membran antara elektroda dalam ruang elektroforesis adalah 8-10cm, diperlukan tegangan 25V per sentimeter panjang membran, dan intensitas arus harus 0,4-0,5 mA per sentimeter lebar membran. Jika nilai-nilai ini tidak tercapai atau terlampaui selama elektroforesis, konsentrasi buffer harus ditingkatkan atau diencerkan.
Konsentrasi buffer yang terlalu rendah akan mengakibatkan pergerakan pita yang cepat dan peningkatan lebar pita. Sebaliknya, konsentrasi buffer yang terlalu tinggi akan memperlambat migrasi pita sehingga menyulitkan pembedaan pita pemisah tertentu.
Perlu dicatat bahwa dalam elektroforesis membran selulosa asetat, sebagian besar arus dialirkan melalui sampel, yang menghasilkan sejumlah besar panas. Terkadang, konsentrasi buffer yang dipilih mungkin dianggap tepat. Namun, dalam kondisi suhu lingkungan yang meningkat atau saat menggunakan tegangan yang lebih tinggi, penguapan air akibat panas dapat meningkat, mengakibatkan konsentrasi buffer yang terlalu tinggi dan bahkan menyebabkan membran mengering.
Volume Sampel
Pada elektroforesis membran selulosa asetat, besarnya volume sampel ditentukan oleh berbagai faktor, antara lain kondisi elektroforesis, sifat sampel itu sendiri, metode pewarnaan, dan teknik deteksi. Prinsip umumnya, semakin sensitif metode pendeteksiannya, semakin kecil volume sampelnya, sehingga menguntungkan untuk pemisahan. Jika volume sampel berlebihan, pola pemisahan elektroforesis mungkin tidak jelas, dan pewarnaan juga memakan waktu. Namun, ketika menganalisis secara kuantitatif pita pewarnaan yang terpisah menggunakan metode deteksi kolorimetri elusi, volume sampel tidak boleh terlalu kecil, karena dapat mengakibatkan nilai serapan yang lebih rendah untuk komponen tertentu, sehingga menyebabkan kesalahan yang lebih tinggi dalam menghitung kandungannya. Dalam kasus seperti ini, volume sampel harus ditingkatkan secara tepat.
Biasanya, volume sampel yang ditambahkan pada setiap sentimeter garis aplikasi sampel berkisar antara 0,1 hingga 5 μL, setara dengan jumlah sampel 5 hingga 1000 μg. Misalnya, dalam analisis elektroforesis protein serum rutin, volume sampel yang ditambahkan pada setiap sentimeter jalur aplikasi umumnya tidak melebihi 1 μL, setara dengan 60 hingga 80 μg protein. Namun, ketika menganalisis lipoprotein atau glikoprotein menggunakan metode elektroforesis yang sama, volume sampel perlu ditingkatkan.
Kesimpulannya, volume sampel yang paling sesuai harus dipilih berdasarkan kondisi tertentu melalui serangkaian percobaan pendahuluan.
Pemilihan Solusi Pewarnaan
Pita yang terpisah dalam elektroforesis membran selulosa asetat biasanya diwarnai sebelum dideteksi. Komponen sampel yang berbeda memerlukan metode pewarnaan yang berbeda, dan metode pewarnaan yang sesuai untuk elektroforesis membran selulosa asetat mungkin tidak sepenuhnya dapat diterapkan pada kertas saring.
Ada tiga prinsip utama dalam memilih solusi pewarnaanmembran selulosa asetat. Pertama,Pewarna yang larut dalam air sebaiknya lebih disukai daripada pewarna yang larut dalam alkohol untuk menghindari penyusutan dan deformasi membran yang disebabkan oleh larutan pewarna yang terakhir. Setelah pewarnaan, penting untuk membilas membran dengan air dan meminimalkan durasi pewarnaan. Jika tidak, membran dapat menjadi melengkung atau menyusut, yang akan mempengaruhi pendeteksian selanjutnya.
Kedua, lebih baik memilih pewarna dengan afinitas pewarnaan yang kuat untuk sampel. Dalam elektroforesis membran selulosa asetat protein serum, amino hitam 10B umumnya digunakan karena afinitas pewarnaannya yang kuat terhadap berbagai komponen protein serum dan stabilitasnya.
Ketiga, pewarna dengan kualitas yang dapat diandalkan harus dipilih. Beberapa pewarna, meskipun memiliki nama yang sama, mungkin mengandung kotoran yang menghasilkan latar belakang gelap setelah pewarnaan. Hal ini bahkan dapat mengaburkan pita yang awalnya terpisah dengan baik, sehingga sulit dibedakan.
Terakhir, pemilihan konsentrasi larutan pewarna adalah penting. Secara teoritis, tampaknya konsentrasi larutan pewarna yang lebih tinggi akan menghasilkan pewarnaan komponen sampel yang lebih menyeluruh dan hasil pewarnaan yang lebih baik. Namun, hal ini tidak terjadi. Afinitas pengikatan antara komponen sampel dan pewarna mempunyai batas tertentu, tidak meningkat seiring dengan bertambahnya konsentrasi larutan pewarna. Sebaliknya, konsentrasi larutan pewarna yang terlalu tinggi tidak hanya membuang-buang pewarna tetapi juga mempersulit perolehan latar belakang yang jelas. Selain itu, ketika intensitas warna mencapai nilai maksimum tertentu, kurva serapan pewarna tidak mengikuti hubungan linier, terutama dalam pengukuran kuantitatif. Dalam elektroforesis membran selulosa asetat, konsentrasi larutan pewarna umumnya lebih rendah daripada yang digunakan dalam elektroforesis kertas.
Detail yang perlu diketahui tentang Bioteknologi Liuyi Beijing's membran selulosa asetattangki elektroforesis dan aplikasi elektroforesisnya, silahkan kunjungi disini :
akuPercobaan pemisahan protein serum dengan Membran Selulosa Asetat
akuElektroforesis Membran Selulosa Asetat
akuBeberapa Pertimbangan Yang Harus Diingat Saat Menggunakan Elektroforesis Membran Selulosa Asetat (1)
Jika Anda memiliki rencana pembelian produk kami, jangan ragu untuk menghubungi kami. Anda dapat mengirimkan pesan kepada kami melalui email[dilindungi email]atau[dilindungi email], atau silakan hubungi kami di +86 15810650221 atau tambahkan Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221.
Referensi:Elektroforesis(Edisi kedua) oleh Mr. Li
Waktu posting: 06 Juni 2023