Percobaan pemisahan protein serum dengan Elektroforesis Membran Selulosa Asetat

Prinsip

Elektroforesis film selulosa asetat merupakan metode elektroforesis yang menggunakan film selulosa asetat sebagai pendukung. Fenomena dimana partikel bermuatan bergerak menuju elektroda berlawanan di bawah pengaruh medan listrik disebut elektroforesis. Karena setiap protein mempunyai titik isoelektrik tertentu, jika suatu protein ditempatkan dalam larutan dengan pH lebih rendah dari titik isoelektriknya, protein tersebut akan bermuatan positif dan bergerak menuju elektroda negatif. Sebaliknya, ia bergerak ke kutub positif. Karena kecepatan pergerakan molekul protein dalam medan listrik berkaitan dengan muatannya, bentuk dan ukuran molekul, protein yang berbeda dapat dipisahkan dengan elektroforesis. Serum mengandung berbagai protein, semuanya memiliki titik isoelektrik pada pH7,5 atau kurang. Ketika serum ditempatkan pada buffer pH 8,6 untuk menjalankan elektroforesis, semua protein serum bermuatan negatif dan akan bergerak menuju sisi positif dalam medan listrik. Karena berbagai protein serum memiliki muatan berbeda pada pH yang sama, ukuran partikel molekulnya berbeda, sehingga kecepatan migrasinya berbeda, dan dipisahkan melalui elektroforesis. Titik isoelektrik dan berat molekul protein serum ditunjukkan pada tabel di bawah ini:

Percobaan yang dilakukan adalah memisahkan berbagai protein dalam serum darah dengan membran selulosa asetat (disingkat CAM) sebagai media pendukung. CAM adalah sejenis toilet berbusaefilm dengan seragam yang baik, dan ketebalan 0,1 mm-1,5 mm, yang memiliki daya serap air tertentu.

Bahan, instrumen dan reagen untuk Elektroforesis CAM

Sampel:serum darah manusia yang sehat

Instrumen:catu daya DYY-6C, tangki elektroforesis DYCP-38C, pemuatan sampel unggul WD-9404

Reagennya

1) membran selulosa asetat 7X9cm

2) Larutan buffer barbitol PH 8,6 (kekuatan ion 0,05-0,09, waktu 0,06tid.): ambil 1,84g Diethyl barbituric acid, lalu ambil 1,03g Diethyl sodium pentobarbital, tambahkan sedikit air suling hingga panas hingga larut, dan buat hingga 1000ml;

3) Noda: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, tambahkan 100ml air suling;

4) TBS/T atau PBS/T: 45ml etanol 95%, 5ml asam asetat glasial, tambahkan 50ml air suling;

5) Larutan Pembersih: 70ml etanol anhidrat, 30ml asam asetat glasial.

Metode Eksperimend

1) Siapkan membran: Rendam membran ke dalam larutan buffer barbitol 30 menit-8 jam, lalu keluarkan, keluarkan larutan berlebih dengan kertas penyerap.

2) Memuat sampel: Bedakan sisi kasar dan sisi halus membran, dan tandai garis pada jarak 1,5 cm ke ujung atas sisi kasar. Muat sampel dengan alat pemuatan sampel unggul pada sisi kasar. Catatan: Sampel harus dimasukkan pada sisi kasar membran. Setelah sampel serum meresap seluruhnya ke dalam membran, balikkan membran, letakkan sisi kasar (yang berisi sampel) menghadap ke bawah ke tangki, dan ujung sampel ditempatkan di elektroda negatif.

3) Elektroforesis: Nyalakan catu daya, 0,4～Membran 0,6m A/cm, waktu pengoperasian 30-45 menit. Setelah menjalankan elektroforesis, matikan listrik.

4) Noda dan bersihkan: Keluarkan membran dari tangki, lalu rendamit ke dalam larutan pewarna selama 5 menit, lalu bersihkan dalam larutan pembersih berulang kali selama 3-4 kali hingga warna latar belakang jernih. Protein serum harus terlihat pada pita, dan biasanya ada lima zona, membentuk ujung atas garis yang ditandai, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.

5) Pengawetan : letakkan elecrtophoresis keringpitadalam larutan pembersih selama 10-15 menit, lalu keluarkan dan tempelkan pada kaca bersih, setelah kering akan menjadi film transparanpita.

PercobaanHasil

Efek pemisahan sampel serum baik, dan tidak ada fenomena band tailing. Pengulangan hasil bervariasi tergantung pada prosedur pengujian dan metode pelaku eksperimen, dan pengulangannya tinggi.

Kesimpulan

Sistem deteksi elektroforesis klinis yang cepat (Tangki elektroforesisDYCP-38C,catu dayaDYY-6C dan pemuatan sampel unggul WD-9404) diproduksi oleh kamiperusahaan Beijing Liuyi Bioteknologi Co., Ltdmemenuhi persyaratan eksperimental,Danhasilnya dapat direproduksi, sederhana dan cepat, cocok untukpengajaranriset.

Liuyi BeijingBioteknologi Co, Ltd mengkhususkan diri dalam pembuatan produk elecrtophoresis untuk industri ilmu kehidupan, yangmemiliki sejarah lebih dari 50 tahun di Tiongkok dan perusahaan dapat menyediakan produk yang stabil dan berkualitas tinggi di seluruh dunia. Melalui pengembangan selama bertahun-tahun, ini layak menjadi pilihan Anda!

Kami sekarang mencari mitra, baik tangki elektroforesis OEM dan distributor disambut.

Untuk informasi lebih lanjut tentang kami, silakan hubungi kami melalui email[dilindungi email]atau[dilindungi email].