Uji Komet: Teknik Sensitif untuk Mendeteksi Kerusakan dan Perbaikan DNA

Uji Komet (Elektroforesis Gel Sel Tunggal, SCGE) adalah teknik sensitif dan cepat yang terutama digunakan untuk mendeteksi kerusakan dan perbaikan DNA pada sel individual. Nama “Comet Assay” berasal dari karakteristik bentuk mirip komet yang muncul pada hasil: inti sel membentuk “kepala”, sedangkan fragmen DNA yang rusak bermigrasi, menciptakan “ekor” yang menyerupai komet.

Prinsip

Prinsip Uji Komet didasarkan pada migrasi fragmen DNA dalam medan listrik. DNA utuh tetap berada di dalam inti sel, sedangkan DNA yang rusak atau terfragmentasi bermigrasi menuju anoda, membentuk “ekor” komet. Panjang dan intensitas ekor berbanding lurus dengan tingkat kerusakan DNA.

Prosedur

1. Persiapan Sel: Sel yang akan diuji dicampur dengan agarosa dengan titik leleh rendah dan disebarkan pada slide mikroskop untuk membentuk lapisan yang seragam.
2. Lisis Sel: Slide direndam dalam larutan lisis untuk menghilangkan membran sel dan membran inti, sehingga DNA terlihat.
3. Elektroforesis: Slide ditempatkan dalam ruang elektroforesis dalam kondisi basa atau netral. Fragmen DNA yang rusak bermigrasi menuju elektroda positif di bawah pengaruh medan listrik.
4. Pewarnaan: Setelah elektroforesis, slide diwarnai dengan pewarna fluoresen (misalnya etidium bromida) untuk memvisualisasikan DNA.
5. Analisis Mikroskopis: Menggunakan mikroskop fluoresensi atau perangkat lunak khusus, bentuk komet dianalisis, dan parameter seperti panjang ekor dan intensitas diukur.

Gambar dari biorender

Analisis Data

Hasil dari Comet Assay dievaluasi berdasarkan beberapa parameter utama:

• Panjang Ekor: Mewakili jarak migrasi DNA, menunjukkan tingkat kerusakan DNA.
• Konten DNA Ekor: Persentase DNA yang bermigrasi ke ekor, sering kali digunakan sebagai ukuran kuantitatif kerusakan DNA.
• Momen Ekor Zaitun (OTM): Menggabungkan panjang ekor dan kandungan DNA ekor untuk memberikan ukuran kerusakan DNA yang lebih komprehensif.

Aplikasi

1. Studi Genotoksisitas: Uji Komet banyak digunakan untuk menilai efek bahan kimia, obat-obatan, dan radiasi pada DNA sel, menjadikannya alat utama untuk pengujian genotoksisitas.
2. Toksikologi Lingkungan: Membantu dalam menganalisis dampak polutan lingkungan terhadap DNA organisme, memberikan wawasan tentang keamanan ekosistem.
3. Penelitian Medis dan Klinis: Comet Assay digunakan dalam mempelajari mekanisme perbaikan DNA, kanker, dan penyakit terkait DNA lainnya. Hal ini juga mengevaluasi dampak terapi kanker seperti radioterapi dan kemoterapi pada DNA.
4. Ilmu Pangan dan Pertanian: Digunakan untuk menilai keamanan pestisida, bahan tambahan makanan, dan zat lainnya, dan untuk mempelajari efek racunnya pada model hewan.

Keuntungan

• Sensitivitas Tinggi: Mampu mendeteksi kerusakan DNA tingkat rendah.
• Operasi Sederhana: Tekniknya mudah, sehingga cocok untuk penyaringan throughput tinggi.
• Aplikasi Luas: Dapat diterapkan pada berbagai jenis sel, termasuk sel hewan dan tumbuhan.
• Tantangan Kuantifikasi: Meskipun menyediakan data kualitatif mengenai kerusakan DNA, analisis kuantitatif sangat bergantung pada perangkat lunak dan teknik analisis gambar.
• Kondisi Eksperimental: Hasil dapat dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti waktu elektroforesis dan pH, sehingga memerlukan kontrol yang cermat terhadap kondisi eksperimen.

Keterbatasan

Comet Assay adalah alat yang sangat berharga dalam penelitian biomedis, ilmu lingkungan, dan pengembangan obat karena fleksibilitas dan sensitivitasnya yang tinggi dalam mendeteksi kerusakan dan perbaikan DNA. Beijing Liuyi Bioteknologi Co. Ltd (Bioteknologi Liuyi)menawarkan ruang elektroforesis horizontal untuk pengujian komet. Selamat datang untuk menghubungi kami untuk berdiskusi tentangUji Kometprotokol.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) memiliki spesialisasi dalam pembuatan instrumen elektroforesis selama lebih dari 50 tahun dengan tim teknis profesional dan pusat R&D kami sendiri. Kami memiliki lini produksi yang andal dan lengkap mulai dari desain hingga inspeksi, dan gudang, serta dukungan pemasaran. Produk utama kami adalah Sel Elektroforesis (tangki/ruang), Catu Daya Elektroforesis, Transilluminator LED Biru, Transilluminator UV, Sistem Gambar & Analisis Gel, dll. Kami juga menyediakan instrumen lab seperti instrumen PCR, mixer pusaran, dan centrifuge untuk laboratorium.

Jika Anda memiliki rencana pembelian produk kami, jangan ragu untuk menghubungi kami. Anda dapat mengirimkan pesan kepada kami melalui email[dilindungi email]atau[dilindungi email], atau silakan hubungi kami di +86 15810650221 atau tambahkan Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221.

Silakan Pindai kode QR untuk menambahkan di Whatsapp atau WeChat.