Persiapan Sampel danMemuat
Karena penggunaan sistem buffer kontinu tanpa penumpukan gel dalam banyak kasus, sampel harus memiliki konsentrasi yang sesuai dan volume yang kecil. Gunakan apipetuntuk menambahkan sampel secara perlahan, dengan 5-10 μg per sumur, untuk menghindari penurunan resolusi yang signifikan. Kapanmemuat sampel, catu daya harus dimatikan. Sampel harus mengandung pewarna indikator (0,025% bromofenol biru atau oranye) dan sukrosa (10-15%) atau gliserol (5-10%) untuk meningkatkan kepadatannya, memekatkan sampel, dan mencegah difusi. Namun terkadang sukrosa atau gliserol dapat menyebabkan pita berbentuk U pada hasil elektroforesis, hal ini dapat dihindari dengan menggunakan 2,5% Ficoll (polivinilpirolidon).
Elektroforesis
Tegangan untuk elektroforesis adalah 5-15 V/cm, umumnya sekitar 10 V/cm. Untuk pemisahan molekul besar, tegangannya harus lebih rendah, biasanya tidak melebihi 5 V/cm.
Pewarnaan
Pewarna fluoresen etidium bromida (EB) umumnya digunakan untuk pewarnaan untuk mengamati pita DNA pada gel agarosa. EB dapat menyisip di antara pasangan basa molekul DNA sehingga menyebabkan EB berikatan dengan DNA. Penyerapan sinar ultraviolet 260 nm oleh DNA ditransfer ke EB, dan EB yang terikat memancarkan fluoresensi pada 590 nm di wilayah merah-oranye pada spektrum cahaya tampak. Pewarnaan gel dalam larutan MgSO4 1 mmol/L selama 1 jam dapat mengurangi fluoresensi latar belakang yang disebabkan oleh EB yang tidak terikat, sehingga memudahkan deteksi sejumlah kecil DNA.
Pewarna EB memiliki beberapa keunggulan: mudah digunakan, tidak merusak asam nukleat, memiliki sensitivitas tinggi, serta dapat menodai DNA dan RNA. EB dapat ditambahkan ke sampel dan dilacak menggunakan serapan UV kapan saja. Setelah pewarnaan, EB dapat dihilangkan dengan ekstraksi dengan n-butanol.
Namun, pewarna EB merupakan mutagen yang kuat, dan tindakan pencegahan, seperti mengenakan sarung tangan polietilen, harus dilakukan selama penanganan. Jeruk acridine juga merupakan pewarna yang umum digunakan karena dapat membedakan asam nukleat untai tunggal dan untai ganda (DNA, RNA). Ia menunjukkan fluoresensi hijau (530 nm) untuk asam nukleat beruntai ganda dan fluoresensi merah (640 nm) untuk asam nukleat beruntai tunggal. Selain itu, pewarna lain seperti metilen biru, hijau metilen, dan kuinolin B dapat digunakan untuk pewarnaan.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) memiliki spesialisasi dalam pembuatan instrumen elektroforesis selama lebih dari 50 tahun dengan tim teknis profesional dan pusat R&D kami sendiri. Kami memiliki lini produksi yang andal dan lengkap mulai dari desain hingga inspeksi, dan gudang, serta dukungan pemasaran. Produk utama kami adalah Sel Elektroforesis (tangki/ruang), Catu Daya Elektroforesis, Transilluminator LED Biru, Transilluminator UV, Sistem Gambar & Analisis Gel, dll.
Kami sekarang mencari mitra, baik tangki elektroforesis OEM dan distributor disambut.
Jika Anda memiliki rencana pembelian produk kami, jangan ragu untuk menghubungi kami. Anda dapat mengirimkan pesan kepada kami melalui email[dilindungi email]atau[dilindungi email], atau silakan hubungi kami di +86 15810650221 atau tambahkan Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221.
Silakan Pindai kode QR untuk menambahkan di Whatsapp atau WeChat.
Waktu posting: 20 Des-2023