1. Klasifikasi
Elektroforesis gel dibagi menjadi tipe vertikal (termasuk gel kolom dan gel pelat) dan tipe horizontal (terutama gel pelat) (Gambar 6-18). Secara umum, pemisahan vertikal sedikit lebih baik daripada pemisahan horizontal, namun sediaan gel horizontal memiliki setidaknya empat keunggulan: terdapat dukungan di bawah keseluruhan gel, memungkinkan penggunaan agarosa konsentrasi rendah; dimungkinkan untuk menyiapkan pelat gel agarosa dengan spesifikasi berbeda; persiapan gel dan pemuatan sampel lebih nyaman; ruang elektroforesis mudah dibuat dan hemat biaya. Karena elektroforesis horizontal dilakukan dengan pelat gel agarosa terendam seluruhnya sekitar 1 mm di bawah permukaan buffer elektroforesis, maka disebut juga elektroforesis terendam.
Tangki Elektroforesis DYCP-31DN untuk elektroforesis gel agarosa
2. Sistem Penyangga
Dalam pemisahan asam nukleat, sebagian besar sistem mengadopsi sistem kontinu. Buffer elektroforesis yang umum digunakan meliputi buffer TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L asam borat, 0,0024mol/L EDTA) dan THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natrium asetat, buffer 0,0018mol/L EDTA). Buffer ini umumnya dibuat sebagai larutan stok 10x dan diencerkan hingga konsentrasi yang diperlukan saat digunakan. Tingkat migrasi DNA linier dan sirkular dalam gel agarosa bervariasi tergantung buffer yang digunakan. Pada buffer THE, laju migrasi DNA linier lebih besar dibandingkan DNA sirkular, sedangkan pada buffer TBE, terjadi kebalikannya.
3. Persiapan Gel Agarosa
(1) Pembuatan Gel Agarosa Horisontal
(a) Siapkan gel agarosa dengan konsentrasi yang dibutuhkan menggunakan 1x buffer elektroforesis.
(b) Panaskan agarosa hingga larut sempurna dalam penangas air mendidih, pada pengaduk magnet, atau dalam microwave. Dinginkan larutan agarosa hingga 55°C dan tambahkan pewarna etidium bromida (EB) hingga konsentrasi akhir 0,5 μg/ml.
(c) Tutup tepi pelat kaca atau akrilik dengan sedikit gel agarosa, tambahkan sisir, dan posisikan gigi sisir sekitar 0,5~1,0 mm di atas pelat.
(d) Tuangkan larutan gel agarosa yang telah meleleh secara terus menerus ke dalam cetakan kaca atau pelat akrilik (ketebalannya tergantung pada volume sampel DNA), hindari masuknya gelembung udara. Biarkan mengeras secara alami pada suhu kamar.
(e) Lepaskan sisir dengan hati-hati setelah pemadatan sempurna. Tambahkan buffer elektroforesis dalam jumlah yang sesuai ke dalam tangki gel, pastikan pelat gel terendam sekitar 1 mm di bawah permukaan buffer elektroforesis.
(2) Pembuatan Gel Agarosa Vertikal
(a) Hilangkan lemak atau residu dari pelat kaca dengan mencucinya menggunakan etanol.
(b) Tempatkan pelat pengatur jarak di antara penahan depan dan belakang, sejajarkan tepi pelat pengatur jarak dengan penahan depan dan belakang, dan kencangkan dengan klem.
(c) Tambahkan 2% agarosa dalam 1x buffer di antara tepi pelat penjarak untuk membentuk sumbat agarosa setinggi 1 cm di bagian bawah ruang pengecoran gel.
(d) Tuang gel agarosa yang telah dilelehkan dengan konsentrasi yang diinginkan, disiapkan dalam 1x buffer, ke dalam ruang gel hingga 1 cm di bawah bagian atas.
(e) Masukkan sisir, hindari gelembung udara terperangkap di bawah gigi sisir. Terkadang, kerutan mungkin muncul di gigi sisir selama pendinginan gel agarosa; dalam kasus seperti itu, cukup tambahkan agarosa cair di bagian atas untuk memadatkannya.
(f) Lepaskan sisir. Untuk mencegah kebocoran buffer pada slot pemuatan, tutup sambungan antara pelat gel agarosa dan ruang elektroforesis dengan agarosa 2% dan tambahkan jumlah buffer yang diperlukan.
(g) Tambahkan 1x buffer elektroforesis ke dalam ruang gel.
(h) Masukkan sampel DNA dengan hati-hati ke dalam gel agarosa di bawah buffer.
Informasi lebih lanjut mengenai pengetahuan dasar tentang elektroforesis gel agarosa akan kami bagikan minggu depan. Semoga informasi ini bermanfaat untuk eksperimen Anda.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) memiliki spesialisasi dalam pembuatan instrumen elektroforesis selama lebih dari 50 tahun dengan tim teknis profesional dan pusat R&D kami sendiri. Kami memiliki lini produksi yang andal dan lengkap mulai dari desain hingga inspeksi, dan gudang, serta dukungan pemasaran. Produk utama kami adalah Sel Elektroforesis (tangki/ruang), Catu Daya Elektroforesis, Transilluminator LED Biru, Transilluminator UV, Sistem Gambar & Analisis Gel, dll.
Kami sekarang mencari mitra, baik tangki elektroforesis OEM dan distributor disambut.
Jika Anda memiliki rencana pembelian produk kami, jangan ragu untuk menghubungi kami. Anda dapat mengirimkan pesan kepada kami melalui email[dilindungi email]atau[dilindungi email], atau silakan hubungi kami di +86 15810650221 atau tambahkan Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221.
Silakan Pindai kode QR untuk menambahkan di Whatsapp atau WeChat.
Waktu posting: 07-Des-2023